The genomic RNA of Hepatitis C virus (HCV) contains a single large open reading frame for virion Nonstructural polypeptides. HCV NS5A protein(p56) have been considered to be involved in viral RNA replication. Previous studies revealed that two phosphoproteins, p56 and p58, were produced from NS5A coding region and p58 was hyperphosphorylated form of p56. We demonstrated that kinase that is important to basal level phosphorylation was associated with C-terminus of NS5A. It is revealed that protein-protein interaction of the kinase and NS5A was not strong enough to verify the association between kinase and NS5A employing the yeast two hybrid system. Using direct in vitro kinase assay and modified affinity matrix-mediated kinase assay, we showed that there was NS5A-associated kinase activity responsible for basal phosphorylation. The deleted NS5A proteins were tested for determination of binding site. The result showed that kinase associate with and mainly phosphorylated C-terminus of NS5A. Furthermore, interaction of kinase and deleted NS5A proteins were much stronger than full size NS5A.
C형 간염 바이러스의 genomic RNA는 구조적 단백질과 비구조적 단백질을 code하는 하나의 open reading frame을 가지고 있다. C형 간염 바이러스 NS5A 단백질은 바이러스의 RNA 복제에 관여한다고 생각되어지고 있다. 앞선 연구들에서 p56과 p58의 두가지 종류의 인산화단백질이 NS5A coding 부위로부터 만들어지는 것이 밝혀졌다. 많은 예에 있어서 단백질의 인산화는 조절기작에 관여하는 것으로 알려져 있다. 우리는 NS5A의 basal level 인산화에 있어서 중요한 역할을 하는 kinase가 NS5A의 C-terminal부위에 결합한다는 것을 보였다. 이 kinase와 NS5A간의 단백질-단백질 상호작용은 yeast two hybrid를 사용하여 그 결합을 증명할 수 있을 만큼 강하지 않은 것으로 밝혀졌다. 직접적인 in vitro kinase assay와 modified affinity matrix-mediated kinase assay를 통하여 우리는 basal phosphorylation에 관계하는 NS5A결합 kinase activity를 밝혔다. Deletion된 NS5A는 이 kinase의 결합부위를 밝히기 위하여 연구되었고, kinase는 NS5A의 C-terminal부위에 결합하여 주로 인산화한다는 것을 알 수 있었다. 또한 kinase와 N-terminal deleted NS5A와의 결합은 full size NS5A와의 결합보다 강하다는 것을 보였다.
