The N-terminal region of SK has the sequence $^42LTSRPAHG^50$ homologous to that of fibronectin. Although the functions of this motif is not elucidated, it is supposed that the motif function as a binding site to form SK-plasminogen complex or as a plasminogen recognition site of the complex in the activating reaction. Mutations were introduced at these residues ($^44S$, $^45R$, $^46P$) by PCR method. Among these mutants, the mutant which had Cys instead of 44Ser showed the lowest activity. The others showed similar activity to that of wild-type SK. To define if this mutant has intact structure or not, CD spectroscopy analysis was performed and this analysis showed that the mutant, Ser44→Cys, had slightly changed structure. Also to prove binding of this mutant to plasminogen, size-exclusion column chromatographic analysis was performed. The results showed that this mutant had binding activity. Therefore the residue, $^44Ser$, is important in catalytic activity of SK-plasminogen complex and the sequence $^42LTSRPAHG^50$ plays a catalytic role in this complex.
On the other hand, although SK is not a protease, it has been suggested that SK has evolved from an ancestral serine protease by gene duplication and fusion. The chimeric protein, which has Streptomyces griseus trypsin-type protease as the N-terminal region and 165 residues of SK C-terminus as the C-terminal region, is expected to activate plasminogen for fibrinolysis by plasminogen binding through C-terminal region of SK. This chimera was expressed in Bacillus subtilis and checked activity of SK and trypsin. Although the trypsin activity remained, SK activity was not shown. This is that the expressed chimera was digested by its trypsin activity. And the candidates of intermolecular proteolytic digestion were $^228Arg$ or $^231Lys$. Therefore C-terminal region of SK alone was so unstable that N-terminal region of SK donate the stability of whole structure.
스트렙토키나제의 N-말단 부위는 피브로넥틴과 상동성이 있는 서열 42LTSRPAHG50을 가지고 있다. 이 서열의 기능은 아직 밝혀지지 않았지만, 스트렙토키나제-플라스미노젠 복합체를 형성하기 위한 결합부위이거나 활성화 반응에 있어서 이 복합체의 플라스미노젠 인식 부위일 것으로 생각된다. 따라서 PCR 방법으로 44번의 세린, 45번의 아르기닌, 46번의 프롤린 잔기에 돌연변이를 도입했다. 이들 변이체 가운데 세린을 시스테인으로 치환한 변이체가 가장 낮은 활성을 보였으나 다른 변이체들은 야생형과 별차이를 보이지 않았다. 이 변이체가 야생형과 같은 구조를 유지하고 있는지 아닌지를 알아보기 위해 CD 스펙트럼 분석을 수행하였는데, 세린을 시스테인으로 치환한 변이체가 야생형과는 약간 달라진 구조를 보여주었다. 또한 이 변이체가 플라스미노젠과 결합하는지를 알아보기 위해 size-exclusion chromatography를 수행한 결과, 플라스미노젠과 결합하는 것으로 밝혀졌다. 그러므로 44번 위치의 세린은 스트렙토키나제-플라스미노젠 복합체의 플라스미노젠과의 결합이 아니라 활성화에 있어서 중요한 역할을 담당하는 것으로 보인다.
한편, 스트렙토키나제는 단백질 가수분해효소는 아니지만 유전자 중복과 융합에 의해 세린계 단백질 가수분해효소로부터 진화되었을 것으로 추정되고 있다. 그래서, S.griseus의 트립신 특이성을 보이는 단백질 가수분해효소를 N-말단으로하고, 스트렙토키나제의 C-말단쪽 165개의 잔기를 C-말단으로 하는 융합단백질을 구성하였는데, 이 융합단백질은 스트렙토키나제 부분이 부여하는 결합능력을 통해 플라스미노젠을 활성화 시킬것으로 추정된다. 그리하여 이 융합단백질을 제조하여 발현시킨뒤, 활성을 검증해본 결과, 스트렙토키나제 활성은 없지만 트립신 활성은 남아있었다. 이것은 발현된 융합단백질이 트립신 활성에 의해 가수분해되었기 때문이다. 따라서 스트렙토키나제의 C-말단 부위만으로는 불안정하기 때문에, 스트렙토키나제의 N-말단 부위가 전체 단백질 구조의 안정성에 기여하는 것으로 보인다.
