A cDNA encoding a guamerin has been cloned in E. coli and characterized. The guamerin is an elastase specific inhibitor with a low molecular weight of cysteine rich polypeptide isolated from Korean native leech, Hirudo nipponia. A cDNA encoding guamerin was identified by PCR amplification with degenerate primers based on its partial amino acid sequences of N-terminal and C-terminal. The deduced amino acid sequence revealed a different amino acid residue from that of guamerin. This cDNA had 71% local identity to cDNA of antistasin, factor Xa inhibitor derived from leech, Haementaria officinalis at the DNA level. The cDNA was expressed in E. coli and a 9-kDa protein was produced with inhibitory activity against neutrophil elastase as expected.
거머린을 코딩하는 유전자의 상보적 DNA를 클로닝하여 대장균에서 발현하였고 그 특성을 부분적으로 규명하였다. 거머린은 단백질 분해효소인 elastase에 특이적인 억제제로 분자량은 매우 작으며 아미노산 중에서 특히 시스테인 잔기가 10잔기나 존재하는 것으로 한국산 흡혈거머리 H. nipponia에서 분리되었다. Degenerate PCR을 이용해 170염기의 유전자를 분리하였으며, DNA 염기서열을 분석하여 이 유전자가 거머린을 코딩하는 유전자임을 확인하였다. 이 유전자에 의해 코딩되는 57개의 아미노산 서열은 알려진 거머린의 서열과는 하나의 아미노산 잔기에서 차이를 보였다. cDNA 서열은 이미 알려진 항혈전 단백질인 antistasin과 71%의 유사성을 보였다. 이 cDNA를 대장균에서 발현시켜 9kDa의 재조합 거머린을 분리하였으며 특성을 일부 분석하였다.